凱氏定氮儀作為定量分析設(shè)備，為了保證測量結(jié)果的準確性和穩(wěn)定性，需定期對設(shè)備進樣驗證和檢驗，以及維護保養(yǎng)；對于制藥行業(yè)同時需完成3Q驗證工作并簽署文件存檔；本文將詳細討論凱氏定氮儀的完整驗證過程(同時適合手動、半自動、全自動凱氏定氮儀)。

一、操作條件和性能驗證：消化爐的檢查：電源插座連接良好，供電功率2200W以上；消化爐表面干凈、爐孔無水垢；消化管底部無裂紋、管口無破損；消化爐加熱正常、能達到420℃、控溫正常、可編程梯度升溫功能正常。

凱氏定氮儀的檢查：電源插座連接良好，供電功率2200W以上；外圍干凈、無漏液、無殘留NaOH固體痕跡；冷凝自來水無泄漏；蒸餾水桶、堿液桶、硼酸桶、標(biāo)準滴定酸桶內(nèi)干凈無雜質(zhì)；蒸餾廢液、滴定廢液管線低于桌面、無盤繞折彎；黑色蒸餾接頭無老化、密封性良好；手動添加蒸餾水、堿液、硼酸正常；蒸汽正常；清洗、廢液排放正常；標(biāo)準酸滴定管和連接管線內(nèi)無氣泡。

試劑的檢查：98%的濃硫酸，CuSO?·5H_?O、K2SO4，NaOH、H3BO3，甲基紅、溴鉀酚綠、乙醇均在三年有效期內(nèi)；0.1N標(biāo)準酸滴定液(HCl?或H₂SO₄)?在三個月內(nèi)且四位有效數(shù)字。

二、回收率的驗證：采用含有銨鹽的標(biāo)準物質(zhì)，如硫酸銨、氯化銨、磷酸二氫銨、硫酸亞鐵銨等無機物；這些物質(zhì)穩(wěn)定、不易分解、雜質(zhì)少純度高、且易于保存；由于在凱氏方法測量過程中利用濃硫酸將樣品中的有機氮轉(zhuǎn)化成無機硫酸銨，因此大多數(shù)情況下都是采用硫酸銨來進行儀器回收率的驗證，具體操作過程如下，同時填寫實驗數(shù)據(jù)表格，便于記錄和存檔：

1、選用純度>99.9%的硫酸銨(如果純度為99%，計算氮含量的時候需扣除1%的雜質(zhì))。

2、將硫酸銨在105℃的烘箱中烘2小時。

3、使用萬分之*平準確稱取2.0000克。

4、用蒸餾水溶解，使用1000ml容量瓶并定容到刻度。

5、用大肚移液管分別準確量取10ml、20ml、30ml、40ml、50ml、60ml溶液，放在不同的蒸餾管中。

6、在凱氏定氮儀上分別進行測試氮含量，使用濃度為0.1N的標(biāo)準酸溶液滴定。

7、根據(jù)滴定體積計算出每次測量的氮含量，并算出回收率：N%含量=(滴定體積(ml)-?空白值(ml))*濃度(N/L)*14.007/樣品重量(g)/10；回收率：氮含量?/ 21.19% * *(硫酸銨中氮含量的標(biāo)準值為：21.19%)。

8、進行評估：回收率>99.0%、RSD<1.0%，說明定氮儀狀態(tài)正常完好；回收率>99.5%、RSD<0.50%，說明定氮儀狀態(tài)*。

也可以用天平直接稱取硫酸銨固體樣品，稱量范圍從0.02-0.12克，二者的回收率測量過程和結(jié)果是等同的。

三、有機物質(zhì)的驗證：回收率的驗證能有效地保證定氮儀的準確性，但沒有驗證消化過程，為了對整套設(shè)備的完整驗證，一般使用含氮的有機物質(zhì)如尿素、甘氨酸、賴氨酸等進行消化、蒸餾、滴定測試；當(dāng)選用尿素進行驗證的時候，由于尿素的氮含量非常高，稱取樣品的量比較少，因此稱量過程需務(wù)必仔細、準確，否則帶來稱樣誤差，導(dǎo)致驗證結(jié)果不理想，在設(shè)備計量過程中多使用尿素進行驗證；在食品分析中一般使用甘氨酸或者賴氨酸進行驗證，因為食品中的蛋白質(zhì)本身由氨基酸組成的，使用其中一種氨基酸進行驗證更貼近現(xiàn)實的分析過程。有機物質(zhì)的稱量范圍需合理，可以進行單次測量，也可以稱取不同質(zhì)量的樣品進行多次驗證，滴定體積覆蓋范圍3-15毫升之間。由于有機物質(zhì)的驗證包含了消化爐的驗證：回收率>98.5%、RSD<1.0%，說明定氮儀狀態(tài)正常完好；回收率>99.0%、RSD<0.75%，說明定氮儀狀態(tài)*。

四、樣品的驗證：市面有出售的各種參考樣品，并標(biāo)有氮含量或者蛋白質(zhì)含量，可以進行樣品驗證；如奶粉、小麥面粉、大豆粉、土壤等。由于這些參考物質(zhì)是多個實驗室測量的平均結(jié)果，同時考慮到有機樣品的有效期和空氣對樣品的氧化，其結(jié)果范圍會相對較寬一些；樣品需低溫保存，包裝袋一旦開封盡快進行測量。為了節(jié)省費用，可以使用本單位多次測量過的樣品進行復(fù)檢，來進行樣品驗證和比對。

瑞典Opsis(奧普賽斯)的全自動凱氏定氮儀、全自動脂肪測定儀、全自動纖維測定儀，嚴格遵循ISO 17025 and Title 21 Part 11標(biāo)準，測量結(jié)果準確性和穩(wěn)定性高，軟件操作流暢和人性化，數(shù)據(jù)自動無線傳輸?shù)接嬎銠C和LIMS；每臺儀器的現(xiàn)場安裝調(diào)試和培訓(xùn)都進行上述驗證，保證用戶測量結(jié)果的準確性和可靠性。